镍柱子纯化表达蛋白的具体步骤，注意事项！！！
1、 过柱前的注意事项：
a、 样品必须澄清、无颗粒物，否则会堵塞柱子、缩短其使用寿命；
b、 包含体洗涤的最后一步及溶解时所用的Buffer中不能含EDTA、DTT、2ME； c、 确保样品及Binding Buffer中有适量的NaCl，以防止杂离子与Ni离子竞争；
2、 过Ni柱的操作步骤：
a、用去离子水洗涤，洗去20％的乙醇、除尽基质中的空气，并能防止下一步中Ni离子沉淀；
b、5×柱体积的Charge Buffer（50mM NiSO4）充电；
c、5×柱体积的去离子水洗涤，去游离的Ni离子；
d、 10×柱体积的Binding Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,5mM咪唑，pH8.0）平衡； e、 上样（手工上样，样品体积应根据目的蛋白的浓度来确定）；
f、 20×柱体积的Washing Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,20-50mM咪唑，pH8.0）洗涤，至无蛋白检出，收集流出液；
g、 Elution Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,500－1000mM咪唑，pH8.0）洗脱，每次1ml，应呈现正态分布（两边稀，中间浓）；
h、 10×柱体积的Binding Buffer洗涤。此时，即可用于纯化同种蛋白，很少需要重新充电。
注：同种蛋白纯化5～10次后，应进行strip和re-charge。
3、柱的清洗与保存：
a、去Ni离子：a、5×柱体积的Strip Buffer（20mMTris-HCl,0.5M NaCl,50mM EDTA，pH7.4）洗涤；b、10×柱体积的去离子水洗涤。
b、去沉淀的蛋白质：a、5×柱体积的0.5M NaOH装满柱子，静置0.5～2hr；b、去离子水洗涤，至流出液的pH值为7。
c、保存：20％乙醇洗涤，再加20％乙醇保存于4℃。
镍柱子纯化表达蛋白的具体步骤，注意事项！！！
1、 过柱前的注意事项：
a、 样品必须澄清、无颗粒物，否则会堵塞柱子、缩短其使用寿命；
b、 包含体洗涤的最后一步及溶解时所用的Buffer中不能含EDTA、DTT、2ME； c、 确保样品及Binding Buffer中有适量的NaCl，以防止杂离子与Ni离子竞争；
2、 过Ni柱的操作步骤：
a、用去离子水洗涤，洗去20％的乙醇、除尽基质中的空气，并能防止下一步中Ni离子沉淀；
b、5×柱体积的Charge Buffer（50mM NiSO4）充电；
c、5×柱体积的去离子水洗涤，去游离的Ni离子；
d、 10×柱体积的Binding Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,5mM咪唑，pH8.0）平衡； e、 上样（手工上样，样品体积应根据目的蛋白的浓度来确定）；
f、 20×柱体积的Washing Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,20-50mM咪唑，pH8.0）洗涤，至无蛋白检出，收集流出液；
g、 Elution Buffer（20mM Tris-HCl,0.5M NaCl,500－1000mM咪唑，pH8.0）洗脱，每次1ml，应呈现正态分布（两边稀，中间浓）；
h、 10×柱体积的Binding Buffer洗涤。此时，即可用于纯化同种蛋白，很少需要重新充电。
注：同种蛋白纯化5～10次后，应进行strip和re-charge。
3、柱的清洗与保存：
a、去Ni离子：a、5×柱体积的Strip Buffer（20mMTris-HCl,0.5M NaCl,50mM EDTA，pH7.4）洗涤；b、10×柱体积的去离子水洗涤。
b、去沉淀的蛋白质：a、5×柱体积的0.5M NaOH装满柱子，静置0.5～2hr；b、去离子水洗涤，至流出液的pH值为7。
c、保存：20％乙醇洗涤，再加20％乙醇保存于4℃。